小鼠β-聯(lián)蛋白(β-Catenin)ELISA試劑盒檢測原理
實驗原理:
將目標抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標準品或標本,其中的目標連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入微生物化的目標抗體,將未結(jié)合的生物素抗體洗凈后,加入HRP標記和親和素,再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計算樣品濃度。
試劑盒操作步驟:
實驗所需自備試驗器材:
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
實驗結(jié)果計算:
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
技術(shù)小提示:
1. 當混合或重溶蛋白溶液時,盡量避免起沫。
2. 為了避免交叉感染,配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。
3. 每次孵育時,請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準確性。
4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色,請避光保存;假如微孔板后,將由物色變成不同深度的藍色。
5. 終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致;加入終止液后,孔內(nèi)顏色由藍變黃;若孔內(nèi)有綠色,則表明孔內(nèi)液體未混勻;請充分混合。
產(chǎn)品有效期:6個月